无核种质材料创制岗位

徐炎

  取出沙藏的葡萄种子，用筛网将种子和沙子分离，放入尼龙网用水轻微搓洗掉外种皮，放入烧杯中，加入清水，除去浮起来的种子，把剩余种子洗净，放入称量盒，分别标记好杂交组合名称，40℃烘箱烘干待用。

  把不同杂交组合的种子装入350 ml组培瓶中，贴好标签，加入20 ml~50ml的75％酒精消毒1 min，无菌水冲洗3次，每次1min，然后加入2%次氯酸钠（将种子完全浸没）和200μl吐温消毒15～30min，无菌水冲洗5次，每次5min。将酒精灯、高温灭菌的滤纸、指甲刀、350 ml组培瓶、无菌水、2 L烧杯、75％酒精、2%次氯酸钠放入超净工作台内，紫外灭菌20 min后吹风。在超净台内重复第一遍消毒的步骤，每次冲洗的时候可将种子转移到新的瓶中，消毒后把种子放在装有滤纸的玻璃皿上晾干，左手戴一只新的乳胶手套，捏住种子，右手用指甲刀剪喙，移入培养基（WPM+20g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+3g/L活性炭+0.1g/L肌醇+0.2mg/L 6-BA）。将培养皿封膜放入组培间。

  2-7d（第2-3天绝大多数胚已出）陆续从剪喙处出的胚移入新的培养基，装有胚的培养基用封口膜封好，放在光照培养室。期间把变绿的胚扶正，子叶向上，胚轴向下。约14d后，将长成的苗移入WPM培养基（WPM+20g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+1g/L活性炭）。约30d即可完成从种子到成苗的过程。