无核种质材料创制岗位

徐炎 王跃进 张朝红 刘国甜

  为准确筛选出葡萄胚挽救F1代杂种材料，通过SSR分子标记技术对胚挽救葡萄杂交的后代进行真实性鉴定。

  主要技术流程为：

  （1）采集‘昆香无核’ב北醇’、‘昆香无核’ב左优红’、‘波尔莱特’ב北醇’、‘红宝石无核’ב北醇’、‘红宝石无核’ב北冰红’、‘红宝石无核’ב玫瑰香’、‘红宝石无核’ב红亚历山大’、‘红宝石无核’ב克瑞森无核’、‘红宝石无核’ב火焰无核’、‘红宝石无核’ב无核白’、‘火焰无核’ב左优红’、‘火焰无核’ב双优’12个葡萄胚挽救杂交组合的F1代杂种株系及其母本的新鲜叶片，做好标记和编号。

  （2）采用改良CTAB法提取葡萄植株的基因组DNA。

  （3）合成用于葡萄真伪性鉴定的30对SSR标记。

  （4）先以12个亲本材料为DNA模板，进行PCR扩增， PCR 反应体系 10 μL：2×Taq Master Mix for PAGE 5 μL，正、反向引物各 0.5 μL（10μmol·L -1 ），2 μL DNA 模板（10 ng·μL -1 ），ddH2O 补至 10 μL。反应程序：94℃预变性 3 min；94℃变性 30s，适宜 T m 值退火 30 s，72℃延伸 40 s，29 个循环；72℃延伸 5 min，扩增产物 4℃保存。

  （5）采用8%聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳进行验证，筛选出‘VVIN52’、‘VV1P26’、‘VDV120’等10个能鉴别父母本、多态性好的标记，用于葡萄胚挽救F1代杂种的鉴定。

  （6）使用筛选出的SSR标记，对所有杂种后代进行PCR扩增和8%聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳，验证真伪性。