无核品种选育岗位

张剑侠　张朝红　徐炎　王跃进

　　1　杂交亲本的选择

　　选择杂种败育型无核葡萄作母本，设计不同杂交组合。

　　2　葡萄花粉的采集、去雄和杂交授粉

　　（1）花粉采集 在作父本的葡萄品种的初花期（花穗中10%左右的小花开放）采摘花穗，带回实验室，摘下或搓开花冠，露出花药，平摊在白纸上，放在日光灯下或阴凉干燥处4～10小时至花药裂开，花粉散出。用细纱网筛去花柄子房等，留下花药研磨，装入青霉素小瓶，封口，放入装有无水CaCl2作干燥剂的瓶内低温保存。

　　（2）去雄 选择生长健壮的植株，在作母本的葡萄品种开花前2～3天（花蕾顶端鼓起变圆，变为黄绿色）开始去雄，选择发育健壮的花穗，一个结果枝保留一个花穗。左手轻捏住穗尖以固定花穗，轻轻摘取花冠，注意不损伤柱头，最后掐去捏过的1/4穗尖，检查有无遗漏的花冠，用手持喷壶喷水，以冲去粘附在柱头上的花粉和使柱头保湿，然后套袋封口，挂牌。

　　（3）授粉 杂交授粉在去雄后的第二天开始进行。在早晨和傍晚，避开高温的正午时间，将花粉装在放有冰袋的冰壶里提到田间葡萄园。用镊子夹住脱脂棉粘取父本品种花粉散在已去雄的母本品种花穗上，授好后迅速套袋，挂牌上记录。连授三天。在采集花粉、去雄和授粉操作时都要注意避免花粉的交叉污染，在更换品种时用70%乙醇喷手和器具以杀死花粉。

　　3　取材

　　对配置的杂交组合，杂交胚珠的取样时间从最后一次的授粉日期开始计算。不同取样时期去田间取回杂交幼果。

　　4　胚挽救操作与成苗的关键技术

　　（1）间采摘的幼果带回实验室后，剪成小穗放入广口瓶内，先用自来水冲洗，用70%乙醇浸润30秒后用无菌水冲洗1次，将广口瓶放入超净工作台，倒入含有效氯1％的次氯酸钠溶液浸泡果粒10-15分钟，期间振荡2-3次，再用无菌水漂洗2-3次。在超净工作台上用无菌的镊子和手术刀在培养皿中将无菌果粒剖开，从剖开果粒中选取长度大于2mm的胚珠接种培养在胚珠发育培养基中，每个150ml三角瓶内接种20个胚珠，进行暗培养，此阶段为胚珠培养阶段。

　　（2）胚珠培养60天后在解剖镜下剖开胚珠，在胚珠内的喙端发现的白色胚即为发育胚。有发育胚的胚珠数量占接种胚珠总数的比率即为胚发育率。将发育胚接种在固体胚萌发培养基上，每只试管（20mm×150mm）接1个胚，胚刚接种7～10天内进行暗培养，胚开始萌动后改为光照培养。胚的子叶、胚根有伸长的视为萌发胚。以萌发胚数占接种胚数的比率作为胚萌发率。此阶段为胚萌发阶段。

　　（3） 胚萌发长成正常完整苗后，剪成1cm的带叶茎断接至继代生根培养基上继代扩繁2瓶（150ml 三角瓶） ， 每瓶2 株， 光照培养。此阶段为成苗阶段。培养室条件：温度25～30 ℃，相对湿度40～60％，光照强度40 μmolm-2s-1，每天16小时。

　　5　炼苗移栽

　　春季对继代扩繁的试管苗加强光照1 周， 无菌水洗去琼脂， 移入无菌基质中， 浇透1 、8MS+0.01mgL-1营养液，罩上一次性塑料杯保湿，间隔4天浇一次无菌水。2周后逐渐打开塑料杯，1个月后去掉塑料杯。4-5月份栽入温室土壤中或大田。