鲜食品种选育岗位团队
徐海英 孙磊 闫爱玲 王慧玲 孙晓荣
1 材料与方法
1.1 材料
试材来自北京市农林科学院葡萄资源圃内的葡萄欧亚种品种‘京秀’、‘香妃’及其杂交后代植株，均为露地栽培4-5年生自根树，采用单臂篱架，多主蔓扇形整枝栽培，株行距0.5×1.5m，使用常规的栽培管理措施。
1.2 取样与预处理
取样时间为2010年8-10月，待四个品种果实完全成熟时开始采收（测糖仪测定达到最大含糖量）。采样时兼顾阴阳面，叶幕层内外和上中下果穗，以及每穗葡萄肩、中、顶部，分散随机取葡萄果实80-100粒，分成三组（三个重复），液氮速冻后于-80℃超低温冰箱保存，用于实验时，4℃解冻，果肉用榨汁机迅速榨取，破碎后， 皮渣浸提1 4 0mi n 后，4000rpm，离心10min，取上清液待用。
1.3 香气成分的GC-MS分析
参照张明霞等HS-SPME方法萃取样品中的香气物质。15ml的样品瓶中加入5ml的样品、1g NaCl、30μl 1.992g/l的内标2-戊醇- 4-甲基和磁力转子后，迅速用带有聚四氟乙烯隔垫的样品瓶盖拧紧后置于磁力搅拌加热台上，40℃，搅拌加热30min，样品瓶中的气-液相香气物质达到平衡后，将已活化或热解析过的PDMS/CAR/DVB固相微萃取头（美国Supelco公司生产）插入样品瓶的顶空部分，萃取头距离液面2cm。在40℃搅拌加热条件下，吸附30min，样品瓶中香气物质达到气-固和气-液平衡，然后将萃取头插入气相色谱进样口250℃，热解析25min。
利用Agilent 6890GC和Agilent5975B MS联用(Agilent, 美国)分析样品中的香气物质；所用的毛细管柱为HP-INNOWAX 60 m×0.25mm×0.25 μm (J & W scientific, 美国)。载气为高纯氦气，流速为1ml/min；固相微萃取手动进样，采用不分流模式，插入气相色谱的进样口，进样口温度为250℃，热解析25min。柱温箱的升温程序为：40℃保持5min，然后以3℃/min的速度升温至200℃，保持2min。质谱接口温度为280℃，离子源温度为230℃，电离方式EI，离子能量70ev，质量扫描范围为20-350u。每个样品做三次重复。
1.4 定量和定性
分别称取不同量的已有萜烯化合物标样用Assay buffer溶解。将各类萜烯香气标样溶液混合配制标准母液，连续梯度稀释10个不同浓度，建立萜烯香气物质标准曲线（香气化合物标样与内标化合物物质的质朴选择离子扫描的峰面积比/该香气化合物标样的浓度）。对于已有标样的香气物质利用其相应的标准曲线来进行定量，没有标样的香气物质利用化学结构相似，碳原子数相近的标样香气物质的标准曲线进行半定量。利用质谱全离子扫描（Scan）图谱，对于已有标样的香气物质，依据本实验已建立的相同色谱条件下该化合物的保留指数和质谱信息进行定性分析。没有标样的香气物质，利用文献报道中相似色谱条件下该化合物的保留指数以及NIST 05标准谱库（NISTChemistry WebBook. http://webbook.nist.gov/chemistry/）比对结果进行半定性分析；对于文献中未报道相似色谱条件下化合物保留指数的香气物质，则根据NIST 05标准谱库比对结果进行半定性分析。
2 结果与分析
定性和定量的分析结果详见附表。在上述葡萄样品中，共鉴定出28种单萜类组分，其中包括单萜醇类11种、单萜烯类10种、单萜氧化物4种、单萜二醇2种和单萜醛1种。
‘京秀’和‘香妃’葡萄中单萜组分的组成差异不大，‘香妃’中含有全部28种组分，而‘京秀’中未检测到两种里那醇氧化物；但‘京秀’中每种萜类化合物的含量均显著低于‘香妃’，‘京秀’单萜类浓度为231.38 μg/L，而‘香妃’中则高达4112.2 μg/L，相应的，‘香妃’具有浓郁的‘玫瑰’香味，而‘京秀’则属于中性葡萄品种。这说明通过该方法检测的单萜含量与葡萄‘玫瑰’香味的浓郁程度有很好的对应关系。
以‘京秀’作为母本，‘香妃’作为父本的杂交获得的12个F1代群体中，20-8-8、20-9-11等7个样品萜类组成同京秀葡萄相同，这些葡萄样品中单萜总量也均小于300 μg/L；而其余5个后代个体单萜的组成与‘香妃’类似，但总量差异较大，浓度分布范围自623.95~1726.92 μg/L，均显著高于‘京秀’，低于‘香妃’。
以‘香妃‘作为母本、作为’京秀‘父本的杂交15个F1群体后代个体中，单萜组成和含量差异都很大。其中，25-9-5中仅发现12种单萜类化合物，总量为175.24 μg/L；25-6-2和26-1-3中发现22种单萜化合物，浓度分别为349 μg/L和228 μg/L；其余样品中含有27种或28种单萜成分，浓度分布范围在248~1245 μg/L不等。其中浓度大于1000 μg/L的样品有25-2-2、25-6-4和25-9-1三个单株。
葡萄样品中“玫瑰”香味相关的单萜化合物定性和定量结果见下页：
