酿酒葡萄栽培岗位

惠竹梅 苏韩梅

  1 目的意义

  油菜素内酯（Brassinosteroids, BRs）是一类具有高生理活性的甾醇类植物激素，可促进葡萄着色与成熟，提高产量和品质；糖是生理代谢的能源物质，可为花色苷的合成提供原料。糖代谢存在于果实的整个发育成熟的过程，是整个生物代谢的桥梁，将蛋白质代谢、脂质代谢、核酸代谢及次生代谢联系到一起。糖信号与植物激素信号通路之间存在信号偶联，协同调控植物的生长发育及花色苷积累。单独喷施适量外源油菜素内酯（24-表油菜素内酯，24-Epibrassinolide，EBR）和蔗糖对葡萄果实品质及花色苷积累具有促进作用，两者交互作用对酿酒葡萄果实品质的影响尚未有研究。本试验以欧亚种（Vitis vinifera L.）酿酒葡萄赤霞珠（Cabernet Sauvignon）为试验材料，探究外源EBR与蔗糖配施对酿酒葡萄果实品质的影响，对提高酿酒葡萄果实花色苷含量，改善葡萄品质，提高葡萄酒品质和葡萄产业的发展有着重要意义。

  2 材料与方法

  2.1 材料

  试验在陕西省杨陵区西北农林科技大学曹辛庄试验农场进行，供试品种为欧亚种（Vitis vinifera L.）酿酒葡萄赤霞珠（Cabernet Sauvignon），避雨棚栽培，南北行向，倾斜式独龙蔓整形，常规葡萄园管理。

  2.2 试验设计    

  选取生长势基本一致的葡萄植株24株，按处理挂牌标记。所用的植物生长调节剂为24-表油菜素内酯（24-Epibrassinolide，EBR），蔗糖（Sucrose， Suc），本试验共设4个处理，试验处理分别为T1：无菌水;T2:0.5mg/L EBR;T3:150mMSuc和T4:0.5mg/L EBR＋150mM Suc  。EBR用 98%的乙醇溶解，乙醇最终浓度为0.1%，吐温-80作为展开剂，其最终含量为0.1%，清水对照也加入等量的乙醇和吐温-80。转色初期进行喷施处理，按照各处理溶液在果穗上均匀喷施，直至葡萄浆果表面滴水为止。根据E-L系统，分别于E-L35（开始转色），E-L36（达到Brix中间值），E-L37（未成熟），E-L38（完全成熟），E-L39（过熟）进行采样。每个处理每次采样选择6棵树，按照“Z”字形采样，每个处理采集10~12 穗葡萄，然后进行生理指标测定。

  【目前进展】完成了葡萄果实百粒重、横纵径、皮籽比等基本物理指标测定、完成了葡萄果实及葡萄酒还原糖、可滴定酸、酚类物质及单体花色苷等生理指标测定。【后续工作】完成基因表达量的测定，整理分析试验数据。

  2.3 测定方法

  2.3.1 常规理化指标的测定

  可溶性固形物的测定采用PAL-1型数显糖度计，产自日本Atago公司；还原糖的测定采用菲林试剂法；可滴定酸采用酸碱滴定法。

  酚类物质提取方法：-40℃冷冻葡萄150粒，立即剥取葡萄皮，液氮冷冻粉碎成粉末装于培养皿中，在冻干机中冻干24小时，取出装于自封袋中，存放于-80℃冰箱待测。提取时称取0.5 g干粉于50 mL离心管中（离心管要用黑胶带或锡箔纸包裹），加入10 mL盐酸甲醇溶液（60%甲醇，0.1%盐酸）料液比1:20，于水温30℃，40功率下超声提取30分钟，接着在4℃下10000 rpm下离心10分钟，收集上清液于丝口瓶中。然后在沉淀物中加入10 mL盐酸甲醇重复以上提取步骤2次，合并3次所有上清液摇匀储存于-80℃冰箱中备用。（以上操作均要避光操作）

酚类物质的测定方法：总酚含量采用福林-肖卡法（Folin-Ciocalteu）测定，以没食子酸表示(mg/g)；单宁含量采用甲基纤维素法测定，以儿茶素表示(mg/g)；花色苷含量采用pH示差法测定，以二甲花翠素-3-葡萄糖苷表示(mg/g)；总类黄酮含量的测定采用Peinado 等(2009)的方法，结果以芦丁表示(mg/g)。

  2.4 数据分析

  试验数据采用Spss数据处理软件结合Excel处理，Origin软件作图，差异显著性采用Duncan新复极差法分析。

  3 初步结果

  3.1EBR与蔗糖配施对酿酒葡萄赤霞珠果实基本理化指标的影响

  由表1可知，在E-L35至E-L38时期，外源喷施EBR和蔗糖对赤霞珠果实横纵径及百粒重的影响不显著，在E-L39时期，外源喷施EBR处理后，赤霞珠葡萄果实横径显著高于对照，外源喷施EBR、Suc以及将两者配施可显著提高果实百粒重，EBR与Suc配施果实百粒重最高，要高于单独喷施EBR和Suc。

  外源喷施EBR和蔗糖对赤霞珠果实可溶性固形物和总糖含量的影响一致，在E-L35和E-L36时期，外源物质处理后，果实可溶性固形物和总糖含量均显著低于对照，在E-L37至E-L39时期，经外源EBR和Suc处理后的果实可溶性固形物和总糖含量均显著高于对照，在E-L37时期，EBR和Suc配施处理后的葡萄果实可溶性固形物和总糖含量要高于单独喷施EBR和Suc，但在E-L38时期，EBR和Suc配施处理后的葡萄果实可溶性固形物和总糖含量要低于对照，而在E-L39时期，EBR和Suc配施处理后的葡萄果实可溶性固形物和总糖含量要低于单独喷施EBR和Suc，但高于对照。在E-L35至E-L38时期，外源喷施蔗糖及EBR后，果实可滴定酸含量均低于对照，但在E-L39时期，外源EBR处理组果实可滴定酸含量高于对照，EBR和Suc配施及单独喷施Suc处理后果实可滴定酸含量与对照相比差异不显著。在E-L36和E-L37时期，单独喷施蔗糖和EBR，果实pH值高于对照，在E-L38和E-L39时期，外源喷施蔗糖后，果实pH值显著低于对照。

  3.2 EBR与蔗糖配施对酿酒葡萄赤霞珠果实糖酸组分的影响

  由表2可知，酿酒葡萄赤霞珠果实中的果糖含量始终高于葡萄糖含量，在E-L36时期，经EBR和Suc喷施处理后的葡萄果实葡萄糖和果糖含量均低于对照， EBR和Suc配施处理后的葡萄果实在E-L37果糖和葡萄含量显著高于对照，且高于单独喷施EBR和Suc，E-L38和E-L38时期，经EBR处理的赤霞珠葡萄果实葡萄糖和果糖含量显著高于对照，而将EBR和Suc配施，果实中葡萄糖和果糖含量显著低于单独喷施EBR和Suc。蔗糖含量在E-L35和E-L36时期被检测到，且其含量随时间逐渐降低，经外源EBR和Suc喷施后的葡萄果实蔗糖含量显著低于对照。

  随着葡萄浆果的发育成熟，酒石酸含量缓慢降低，在E-L35时期，果实中酒石酸含量要低于苹果酸含量，但在E-L36时期之后，果实中苹果酸含量始终低于酒石酸含量。在E-L35和E-L36时期，各处理组果实酒石酸和苹果酸含量显著低于对照，在E-L37和E-L38时期， EBR和Suc配施处理组酒石酸和苹果酸含量显著高于对照，而在E-L39时期，各处理组间酒石酸和苹果酸含量与对照相比无显著差异。

  3.3 EBR和蔗糖处理对葡萄果实花色苷含量的影响

  如图1所示，在E-L36和E-L37时期，外源喷施蔗糖、EBR以及将蔗糖与EBR配施均可显著提高果实花色苷含量，外源喷施蔗糖效果较好，将EBR与蔗糖配施效果不及单独喷施蔗糖和EBR好，但优于对照。在E-L38和E-L39时期，与对照相比，外源喷施EBR可显著提高果实花色苷含量，外源蔗糖处理组果实花色苷含量显著低于对照，将EBR和蔗糖配施，果实花色苷含量显著高于单独喷施蔗糖，但仍低于对照。

  3.4 EBR和蔗糖处理对葡萄果实总酚含量的影响

  如图2所示，总酚含量整体趋势先降低后趋于平稳，在E-L35和E-L37时期，单独喷施EBR和Suc组总酚含量要显著高于对照，而EBR和Suc配施处理组总酚含量要显著低于单独喷施EBR和Suc，但均显著高于对照。在E-L36和E-L37时期，EBR和Suc配施处理组总酚含量显著高于其他处理组和对照组。在E-L39时期，各处理组总酚含量均显著低于对照组，Suc处理组总酚含量要低与EBR和EBR+Suc处理组。

  3.5 EBR和蔗糖处理对葡萄果实类黄酮含量的影响

  如图3所示，在葡萄转色期到成熟期，果实中类黄酮含量先降低后趋于稳定，在E-L35和E-L37时期，单独喷施EBR和Suc处理组类黄酮含量显著高于对照，而EBR和Suc配施处理组类黄酮含量显著低于单独喷施EBR和Suc，但均显著高于对照组。在E-L36时期，Suc和EBR＋Suc处理组类黄酮含量显著高于对照组和EBR处理组，EBR处理组类黄酮含量与对照相比无显著差异。在E-L38时期，EBR＋Suc处理组类黄酮含量显著高于对照组，而单独喷施EBR和Suc处理组类黄酮含量无显著差异，但低于对照组。在E-L39时期，EBR处理组类黄酮含量较高，显著高于Suc和EBR＋Suc处理组与对照组。Suc、EBR＋Suc处理组类黄酮含量与对照组相比无显著差异。

  4  结论

  （1）蔗糖与EBR配施对葡萄果实基本理化指标的影响有显著差异。

  （2）外源喷施Suc和EBR对赤霞珠葡萄果实糖酸组分及其含量影响显著。

  （3）蔗糖与EBR配施对葡萄果皮花色苷、总酚和类黄酮含量影响显著。