蓝莓贵阳综合试验站
摘要：本研究以贵州主栽的高丛类蓝莓“奥尼尔”为试验材料，采用顶空固相微萃取、气相色谱-气质联用仪（HS-SPME/GC-MS）和微波消解、电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）分别对贵州三个产区‘奥尼尔’果实挥发性成分和矿质元素进行检测和分析。结果表明：三个产区‘奥尼尔’共检测到48种挥发性成分，且挥发性成分含量在三个产区差异显著，惠水含量最高为2113.51 µg/g，其次为高坡1944.65 µg/g，麻江含量较低为1008.65 µg/g。三个产区‘奥尼尔’共检测12种矿质元素，其中K和Ca元素含量相较其他矿质元素较高，Ba和Cr元素含量较低。矿质元素含量在三个产区差异显著，高坡含量较高为8.51 g/kg，其次为惠水8.28 g/kg，麻江含量较低7.82 g/kg。
关键词：蓝莓；挥发性成分；气相色谱—气质联用；矿质元素；电感耦合等离子体发射光谱
蓝莓（Vaccinium spp.）又名都柿、黑豆树、笃斯越桔等，为杜鹃花科越橘属多年生浆果类丛生灌木[1]。蓝莓果肉细腻、清爽可口、香气独特；同时蓝莓果实富含矿质元素、维生素、类黄酮、花青苷等活性物质；具有延缓衰老、改善视力、预防癌症、降血压、降胆固醇、预防心血管疾病等功能[2-5]。
外观及风味是影响果实品质最重要的因素，这些因素通过果实的色泽及香气反馈[6]。香气是衡量蓝莓果实品质的关键因素之一，能直观评价蓝莓品质。多种挥发性成分共同作用构成蓝莓独特的香味，同品种不同产区蓝莓果实所含挥发性成分种类和含量均存有所不同，致使蓝莓的风味存在差异性[7]。矿质元素对维持人体机能的正常运转与平衡起着重要作用[8]，矿质元素的研究多存在与各种蔬菜、水果、中草药等中[9-11]，不同产区蓝莓品种挥发性成分和矿质元素含量研究较少。本研究利用顶空固相微萃取、气相色谱—气质联用仪和微波消解、电感耦合等离子体发射光谱仪，对贵州三个产区（高坡、惠水、麻江）栽培的高丛蓝莓品种‘奥尼尔’挥发性成分和矿质元素进行测定分析，以探索其果实挥发性成分及矿质元素与生态环境的关联性，为育种和风味评价提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
2019年5月在贵阳花溪高坡（106°49′ E、26°16′ N），海拔1060 m；惠水县三都镇蓝莓基地（106°36′ E、26°1′ N），920 m；麻江县龙山镇海升基地（107°72′ E、26°37′ N），海拔760 m 三个蓝莓产区采摘高丛蓝莓奥尼尔（O′Neal）为实验材料。采摘蓝莓果实时选择五年以上远离公路且生长状态良好的蓝莓树种，从每株蓝莓树顶部东南西北四个方向采摘成熟度相似的蓝莓果实，带回实验室，放置于-80 ℃的冰箱冷冻备用。
乙醇、氯化钠天津市科密欧化学试剂有限公司；正己烷（色谱纯）、C7-C40饱和烷烃混合标准品、二辛醇北京科创欣达科技有限公司；硝酸、过氧化氢上海阿拉丁生化科技股份有限公司；无机元素混合标准物质和磷溶液标准物质国家标准物质资源共享平台。
1.2 仪器与设备
气相—质谱联用仪7890B/7000C-GC/MSD（Agilent，美国）；三合一自动进样器（InLab，中国）；微波消解仪 MARS CEC、电感耦合等离子体发射光谱仪ICP-OES（Thermo，美国）；电热恒温鼓风干燥箱（XMTD，中国）；电子天平，感量为0.0001 g（梅特勒—托利多仪器有限公司，瑞士）；50 mL塑料容量瓶、透明圆底顶空进样瓶及金属盖、萃取头 50/30 µm 二乙烯苯/碳筛/聚二甲基硅氧烷（色谱科公司，美国）。
1.3 方法
1.3.1 挥发性成分实验方法
本实验蓝莓果实挥发性成分测定参照Cesar[12]的处理方法，并加以适当修改。液氮将蓝莓果实速冻后快速研磨成粉末，称取1.00 g于20 mL顶空瓶中，同时加 0.10 g NaCl与10 µL 28.39 mg/kg内标物质（二辛醇/乙醇溶液），密封上样。每个品种都进行3次重复。
用气相色谱-气质联用仪对样品进行分析；采用顶空-固相微萃取法萃取，自动进样。样品在40℃、400 rmp条件下孵化20 min，萃取30 min，萃取头于250℃解吸附3 min。气相色谱条件：（）色谱柱，氦气（He）载气，1 mL/min流速，1 µL进样体积，3:1分流比。升温梯度参考彭歌[13]的方法：40℃持续2 min，1℃/min 升温至45℃并持续2 min，0.5℃/min 升温至48℃，2℃/min 升温至58℃，0.5℃/min升温至62℃，2℃/min 升温至90℃，5℃/min 升温至130℃，15℃/min 升温至250℃。后运行温度为210℃，持续2 min。质谱条件：质谱检测器采用EI模式，电子能量为；质谱检测范围为。进样口，离子源与转移线温度分别为250℃，230℃，280℃。
1.3.2 挥发性成分数据分析
保留指数计算：采用内标法、各饱和烷烃混合标准品保留指数RI相结合。各色谱峰对应质谱图运用工作站以及谱库中标准化合物的质谱图对照并结合保留指数（RI）进行定性分析。利用峰面积归一化法进行定量，以各组分峰的峰面积占所有峰的总面积的比例为该化合物的相对含量，以二辛醇/乙醇溶液为内标物计算释放量。
1.3.3 矿质元素实验方法
参考Paulina[14]等的方法，取蓝莓鲜果实于105℃干燥箱中干燥15 min，再调至65℃下烘干50 h，直至恒重；烘干后果实研磨并过60目筛，放入自封袋中保存。称取0.2500 g粉末于微波消解管中；加入6 mL 硝酸，摇匀后过夜；加入2 mL 过氧化氢，摇匀后放置20 min，放入微波消解仪（CEC）中消解。升温程序：以20℃/min升温至100℃并持续2 min，以10℃/min升温至150℃并持续10 min，以6℃/min升温至180℃并持续30 min。消解结束冷却后，将溶液转移到50 mL塑料容量瓶中定容并过滤，待测液用电感耦合等离子体发射光谱（ICP-OES）测定分析。每个样品均进行3次生物学重复。
ICP-OES条件：射频功率为1500 W、氩气纯度99.99%、等离子体气流速为15 L/min、辅助气流量为0.40 L/min、载气流量为0.80 L/min、雾化室温度为2℃、两次重复。
1.3.4矿质元素数据分析
参考康露等[15]配置标准溶液，Fe、Cu、Ba、Cr、Mn、Zn和Mg配制成0、0.05、0.25、0.5、2.5、10 µg/mL的无机元素混合标准液；Al、Ca、Na和K配制成0、0.1、0.5、1、5、20 µg/mL的无机元素混合标准液；P元素配制成0、0.5、2、5、10、100 µg/mL的标准液。
2 结果与分析
2.1 蓝莓挥发性成分分析
2.1.1 挥发性成分总离子流图及含量
将三个产区‘奥尼尔’样品用热脱附-GCMSD 分析，得到总离子流对比图。如图 2-1所示。由表2-2可知，三个产区‘奥尼尔’中共检测出 48 种挥发性成分，包括10种醇类物质、10种醛类物质、12种酯类物质、7种苯环类物质和9种其他类物质。惠水、高坡、麻江三个产区挥发性成分总含量分别为2113.51、1944.65 和1008.65 µg/g。
2.1.2 挥发性成分分析
结合图2-1和图2-2可知，三个产区的挥发性物质种类数量以及相对含量不一致，在高坡醇类和酯类种类均为10种，但酯类含量略高于醇类，相对含量分别为33.32%和29.30%；惠水产区酯类数量多起含量也明显高于其他类物质，其相对含量为60.37%；麻江产区醛类和酯类挥发性成分数量一致，但在相对含量上醛类物质最高，为30.10%。
三个产区‘奥尼尔’中均含有正己醇、2-乙基己醇、反式p-薄荷脑2,8-二烯醇等29种挥发性成分。醇类物质中以芳樟醇、正己醇和反式p-薄荷脑2,8-二烯醇 3种醇类物质为主，芳樟醇既含有紫丁香、铃兰与玫瑰的花香，又有木香、果香和香柠檬香等青香，植物中绿萼青蒂常含有此类青香；正己醇具有橘香和果香，广泛存在于柑橘类、浆果等水果及茶叶中；反式p-薄荷脑2,8-二烯醇有淡淡的青香气味[16-17]。
反式-2-己烯醛和己醛这两种醛类在‘奥尼尔’中含量较高，占醛类物的86%左右，为主要醛类物质。反式-2-己烯醛具有青香、果香、辛香和脂肪香，浓度较低时有令人愉快的绿叶清香和水果香气；己醛有果香气味，广泛存在于苹果、草莓、茶叶等物质中[18]。
酯类中仅有异戊酸乙酯和异戊酸甲酯含量较高，高坡、惠水和麻江这两种酯类物质含量分别为600.54、1198.86和201.33 µg/g，占酯类物质的90%左右。异戊酸乙酯类似苹果、桑子香气，可以用制作香料、香精等；异戊酸甲酯具有药草香、甜香气味[19]。
2.2 蓝莓矿质元素分析
三个产区‘奥尼尔’矿质元素含量见表 2-3。共检测12种矿质元素，包括微量元素铁、铜、锰、锌和铬5种，常量元素铝、钡、钙、镁、钠、钾和磷 7种。
三个产区，蓝莓果实微量元素中Fe和Mn元素含量相对较高，范围在100.64~113.55和41.62~61.28 mg/kg；Cr元素含量相对较低，仅在5.44~8.02 mg/kg之间。Fe元素参与人体多种蛋白质组成和生理生化反应，为人体提供能量；在植物生长过程中，Fe与植物光合作用、呼吸和生物固氮等有关[20]。Mn能够维持人体正常的糖代谢和脂肪代谢，在植物中，Mn元素是叶绿体的构成部分，参与氧化还原过程，同时能够加速花粉萌发、花粉管的伸长，提高植株结实率和抗病虫能力[21]。Fe、Cu、Zn三种微量元素在三个产区没有明显差异，但Mn和Cr两种元素在惠水明显高于其他两个产区。
常量元素中K和Ca元素含量相对较高，含量在3987.63~4551.79和1969.77~2170.01 mg/kg；但Ba含量仅在3.82~5.56 mg/kg之间。Ca元素能够强化神经系统细胞的神经传导功能，植物中，Ca元素是细胞膜中层果胶钙的重要组成成分，可增加细胞的坚硬度，增强果实的贮藏能力。K元素可促进蛋白质的合成，增加维生素的含量，同时防止细胞失水，提高抗旱、抗寒、抗病和抗倒伏的能力；K还可使果实膨大，提高果实的含糖量及贮运性能[22, 23]。
‘奥尼尔’果实中Mg和Ba元素在高坡含量分别为580.81和5.56 mg/kg，明显高于惠水和海升；Ca和Na元素在三个产区无明显差异性；K和P元素在海升含量分别为3987.63和486.49 mg/kg，显著低于其他两个产区；Al元素在海升含量较高，在高坡含量较低。
微量元素与常量元素在三个产区的变化趋势没有变，说明与产区无关。
3 讨论与结论
本研究对三个产区‘奥尼尔’挥发性成分进行检测分析，共检测到48种挥发性成分，高坡产区主要的挥发性成分为酯类和醇类物质；惠水产区以酯类物质为主要挥发性成分；海升产区醛类、酯类和醇类相对含量较高，这可能与采摘时间和成熟时期有关；但异戊酸乙酯、芳樟醇、己醛、右旋萜二烯和反式-2-己烯醛这五种挥发性成分在三个产区均为主要成分，构成了‘奥尼尔’独特的风味。
‘奥尼尔’中微量元素铁和锰含量较高，铬含量较低；常量元素钙和钾含量较高，钡含量较低，铁、铜、锌、钙和钠在三个产区含量无明显差异，其他元素三个产区变化规律不显著，说明“奥尼尔”果实中矿质元素与地理位置无关，与蓝莓对不同矿质元素吸收能力不同有关。这可能与贵州地带性土壤矿质元素分布不均，及个体蓝莓对矿质元素吸收能力不同有关。