鲜食葡萄品种改良岗位

  1 材料与方法

  1.1 材料

  试验于 2018 年4月-2019年12 月在北京市林业果树科学研究院葡萄实验地及实验室进行。供试材料无核品种‘Afrodita’及无核香味父本爱神玫瑰、寒香蜜、无核翠宝和无核大粒的瑞都无核怡、品质优良的晚熟克瑞森无核、和香味早熟品种早玫瑰香。所用的杂交组合为: ‘Afrodita’ב爱神玫瑰’、‘Afrodita’ ב寒香蜜’，‘Afrodita’ ב无核翠宝’、‘Afrodita’ ב瑞都无核怡’、‘Afrodita’ ב克瑞森无核’、‘Afrodita’ב早玫瑰香’及‘Afrodita’ 的自然杂交。

  1.2 试验方法

  （1）田间杂交。在始花期采集正常发育父本花序，收集花粉。于开花前1～3d对母本进行去雄，去雄后第2d进行授粉，连续授粉3d。去雄后及每次授粉后立即套袋。每种组合杂交15穗。

  （2）幼果采集和处理。将采下的幼果带回实验室,将果穗剪成4～5粒的小穗放入烧杯中，用自来水冲洗1～2 h，再在超净工作台上，先用75%酒精漂洗1 次，再用0.1%的升汞消毒7～8 min ，最后用无菌水漂洗3次。用解剖刀取出胚珠接种在内装40 mL培养基的100 mL三角瓶中，每瓶接种4～6 枚，放在培养室内培养。

  （3）发育培养 ① 2018年首次授粉30d后开始，每10d采摘1次‘Afrodita’ ב爱神玫瑰’、‘Afrodita’ב瑞都无核怡’、‘ AFRODITA’ב克瑞森无核’和‘Afrodita’自然杂交的杂交幼果，每次150粒，共取4次样，接种在W1培养基中。②2019年授粉后50天后采‘Afrodita’ב爱神玫瑰’、‘Afrodita’ב寒香蜜’，‘Afrodita’ ב无核翠宝’、‘Afrodita’ב瑞都无核怡’、‘Afrodita’ב克瑞森无核’、‘Afrodita’ב早玫瑰香’、‘Afrodita’自然杂交的杂交果接种在以下4种培养基中：W1  改良Ms+500mg/l水解络蛋白+蔗糖60g/l+琼脂6.5g/l+活性炭1.5 g/l，W2  NN +500mg/l水解络蛋白+蔗糖60g/l+琼脂6.5g/l+活性炭1.5 g/l，W3  改良Ms+0.5mg/ GA3+1.5mg/lIAA+500mg/l水解络蛋白+蔗糖60g/l+琼脂6.5g/l+活性炭1.5 g/l  W4  NN+0.5mg/l GA3+1.5mg/l IAA +500mg/l水解络蛋白+蔗糖60g/l+琼脂6.5g/l+活性炭1.5 g/l， 25  ℃下，光照1600lx培养。

  （4）胚萌发阶段胚培养。胚发育培养60 d后剥胚。剥胚时，统计胚发育情况。若解剖镜下看到亮白色胚，视为胚发育；若所剥胚珠内无亮白色胚（胚珠内无胚或胚褐化），视为胚败育。将发育的胚接种到胚萌发培养基1/2Ms+0.2 mg/LIBA+20 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂+1.0 g/L活性炭中继续培养，pH值5.8，25 ℃培养。培养30d后调查胚萌发率。

  胚发育率（%）=（发育胚数/接种胚珠数）×100

  胚萌发率（%）=（萌发胚数/接种胚珠数）×100

  对于①处理统计4次取样时期的幼胚发育率（W1，25 ℃）与萌发率，确定不同杂交组合佳取样期。②处理比较各杂交组合在授粉后50d取样杂交胚的胚发育率（W1- W4，25 ℃）和萌发率。对于②处理60d后分别统计胚发育率，研究不同培养基对7个不同杂交组合的杂交幼胚发育率的影响。

  所有数据采用SPSS18.0软件进行统计分析和差异比较，用Excel2003处理数据。

  2 结果与分析

  2.1 父本对取样时期确定的影响

  选取了父本为早熟的‘爱神玫瑰’ 、中熟的‘瑞都无核怡’ 及晚熟的‘克瑞森无核’ 3 个组合和自然杂交的胚为试材， 来确定最佳取样时期。 从表 1可以看出， 除了‘ Afrodita’ 自然杂交， 其他 3 个杂交组合‘ Afrodita’ ב爱神玫瑰’ 、 ‘ Afrodita’ ב瑞都无核怡’ 、 ‘ Afrodita’ × ‘克瑞森无核’ 均以授粉后 50 d 取样的胚发育率和萌发率最高，显著高于其他取样时期，胚发育率分别为 27.52%、32.17%、 9.30%，胚萌发率分别为 12.84%、 18.20%、5.81%。 ‘ Afrodita’ 自然杂交 50 d 和 60 d 取样的胚发育率和萌发率均差异不显著，胚发育率分别为

  26.38%和 27.40%， 胚萌发率分别为 15.95%和16.12%。 可见，最佳取样时期与母本的胚发育进程密切相关， 与父本成熟的早晚无关。

  2.2 父本对幼胚生长发育的影响

  从表 2 可以看出， 父本不同， 杂交胚的发育和萌发率也不同。 亲本无核交有核的组合‘ Afrodita’ב早玫瑰香’ 杂交胚的发育率和萌发率（ 38.70%、22.58%）均高于其他 5 个亲本无核交无核的组合。父本有核有利于杂交胚的发育，但是却降低了后代的无核率。在亲本无核交无核的组合中，父本为‘无核翠宝’ 的胚发育率（ 34.72%） 较高， 显著高于除‘ Afrodita’ × ‘瑞都无核怡’ 外的其他 3 个无核亲本； 胚萌发率 18.05%， 显著高于其他 4 个无核亲本。父本‘瑞都无核怡’ 的胚发育率（ 35.33%） 较高，但萌发率（ 14.00%） 却不高。 ‘ Afrodita’ 自然杂交的胚发育率（ 31.90%） 显著低于‘无核翠宝’ 和‘瑞都无核怡’作父本的，但胚萌发率（ 20.85%） 却比二者要高。 ‘ Afrodita’ × ‘克瑞森无核’ 杂交组合无论胚发育率还是萌发率都是最低的， 分别为15.78%、 7.89%。

  2.3 不同发育培养基对幼胚发育率的影响

  从表 3 可以看出， 除了‘ Afrodita’ ב无核翠宝’ 和‘ Afrodita’ ב克瑞森无核’ 2 个组合外，其他 5 个组合的胚发育率都是基本培养基为改良MS 的 W1、 W3 培养基较基本培养基为 NN 的 W2、W4 培养基高， 其中‘ Afrodita’ב瑞都无核怡’的杂交胚更适合生长在添加了植物生长调节剂的W3 培养基中，‘ Afrodita’ב爱神玫瑰’、‘ Afrodita’ב寒香蜜’、‘ Afrodita’ ב早玫瑰香’和‘ Afrodita’ 自然杂交这 4 个组合胚发育率较高的都是 W1 培养基。 ‘ Afrodita’ ב无核翠宝’ 组合的胚发育率是添加植物生长调节剂的 W3、 W4 培养基均显著高于不添加植物生长调节剂的 W1、 W2 培养基，该组合胚发育较合适的培养基是 W3。 ‘ Afrodita’ ב克瑞森无核’ 组合的胚发育率是基本培养基为 NN 的W2、 W4 培养基均显著高于基本培养基为改良 MS的 W1、 W3 培养基，该组合胚发育较合适的培养基是 W4。