育种方法与技术岗位

马文静 吴伟 傅佩宁 卢江

  由病原菌侵染引起超敏反应（HR），是植物抗病的重要手段。鉴别、寻找可以引起细胞坏死（HR）的PAMP或者效应因子蛋白对于揭示植物与病原菌之间的互作具有重要的意义。一些病原菌的特殊的PAMP可以引起植物PTI反应，从而导致植物的气孔细胞坏死。壳寡糖被证明可以直接触发拟南芥气孔细胞坏死，而导致植物对病原菌的抗性。葡萄霜霉菌通过葡萄的气孔细胞侵入植物叶片，因此寻找可以引起葡萄叶片坏死的葡萄霜霉菌PAMP，对于生物防治葡萄霜霉病具有重要的意义。我们借鉴拟南芥鉴定PAMP诱导气孔细胞坏死的方法，将其成功应用于葡萄研究中。

  首先取幼嫩葡萄叶片用打浆机打成匀浆，使表皮与叶肉细胞分离；纱布过滤匀浆，纱布上留下细胞；将过滤下来的细胞放入ddH2O中恢复2h；在细胞浆中加入壳寡糖，混匀处理；在细胞浆中加入FDA染色；将细胞浆过滤，用水冲洗后，放在玻片在荧光显微镜（GFP）下观察。具有活力的保卫细胞可被FDA染色（Mock），而壳寡糖处理后的保卫细胞则不能正常染色。