育种方法与技术岗位

高宇 田珊珊 卢江

　　葡萄是世界上栽培历史最长的果树种类之一，也是世界性第二大水果。葡萄在分类学上被分为真葡萄亚属与圆叶葡萄亚属，当今生产上广泛栽培的葡萄品种属于真葡萄亚属中欧洲葡萄种群，经过多年的人工选育，具有风味好，坐果率高，耐储运的优势性状，但对各类生物性，如霜霉病（卵菌）、灰霉病（真菌）等病害与非生物性胁迫（温度、水分等）的抗逆性较差。

　　而真葡萄亚属中其他种群（美洲种群和东亚种群）与圆叶葡萄亚属被发现具有各种优良的抗逆性状。深入探索与这些抗性性状相关联的基葡萄胚性愈伤诱导方法探索因，并整合它们到高品质但感病的品种中，是抗病分子育种的重要途径。候选基因的功能验证需要稳定的葡萄转基因体系，然而由于葡萄本身基因型的复杂性，迄今为止葡萄的遗传转化率仍然较低。要通过遗传转化的方式提高葡萄品质，就必须建立高效的再生体系，葡萄体胚诱导与再生体系建立研究仍是目前葡萄转基因研究的重要前提。

　　目前国内外研究者主要从雌蕊、雄蕊、花蕾等上诱导出胚状体，并获得再生植株。体胚的诱导效率很大程度上取决于材料的生理状态，但由于受植物本身物候期的影响，取材受到极大的限制，故本研究尝试以葡萄组培苗的叶片、叶柄、茎节、节间茎段等营养器官为原材料，用不同浓度的激素诱导胚性愈伤，结果发现茎节的诱导效果最好（图1），成功率在10.3%-20.2%，愈伤诱导培养基（CIM）的最佳配比为2.5%蔗糖，18 μM2,4-D （萘乙酸），9 μM 6- BA（6-苄氨基嘌呤），一个月后转到胚性愈伤诱导培养基（medium A）上，其最佳配比为6%蔗糖，1 μM 6-BA，10 μM NOA（萘氧乙酸），20 μM IAA（生长素），0.25 %活性炭，每个月继代一次，持续7个月，期间将诱导出的胚性愈伤放到新的medium A上，并挑出部分胚性愈伤诱导成苗（图2），该培养基的配比为2.5 %蔗糖，0.5 μM 6-BA。该研究对今后葡萄胚性愈伤诱导工作具有重要的借鉴意义。