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病虫害防控研究室
董雅凤 张尊平 胡国君
葡萄为多年生植物，病毒主要随砧木和接穗广泛传播，一旦侵染，即终生带毒，持久危害，无法通过化学药剂进行有效控制。培育和栽植无病毒苗木是防控葡萄病毒病的根本措施。葡萄无病毒苗木根系发达，定植成活率高；树体长势旺盛，主干茎粗壮；产量高、品质好；抗逆性强，可减少农药和肥料使用数量和次数，降低生产成本，减轻环境污染。自20世纪60年代以来，欧美发达国家普遍栽培无病毒葡萄苗木，并实施严格的苗木认证生产制度，有效地控制了病毒病的危害，也为葡萄和葡萄酒的优质生产奠定了良好基础。
病毒脱除是培育葡萄无病毒苗木的基础，采用热处理、茎尖培养、茎尖培养结合热处理等技术，能成功地脱除多种葡萄病毒，其中，茎尖培养结合热处理方法脱毒效果最好。脱除病毒并经检测无毒后，即可从无病毒母株上采集插条或接穗，用于繁殖。应用较多的葡萄脱毒技术主要有三种，即热处理脱毒、茎尖培养脱毒、热处理结合茎尖培养脱毒。
热处理脱毒技术：高温可使病毒钝化，抑制病毒的繁殖和扩展。美国早在20世纪60年代初就开始应用热处理方法脱除葡萄病毒，该法现已被世界各国广泛采用。具体步骤如下：头年春季，将需热处理的材料在营养土中进行扦插繁殖。插条生根后，移入花盆中，在温室内培养。第二年春季，当新梢长到15～20cm时，即可进行热处理。将准备脱毒的葡萄盆苗放入热处理箱中进行热处理，热处理所需温度因病毒种类而异，一般为35℃～40℃。为减少高温对植株的伤害，近年来，人们开始采用变温热处理方法（如，白天40℃、16小时；夜间35℃、8小时）。热处理所需时间与病毒种类有很大关系，短者20天即可；长者需要120天，甚至更长时间。据报道，葡萄扇叶病毒对高温最敏感，38℃下培养1个月，即可脱除。在确保热处理苗木成活的情况下，适当延长处理时间可提高病毒脱除效果，热处理达到预定时间后，剪取1.5～2cm的新梢顶端直接扦插生根。嫁接或扦插成活的葡萄苗，单株编号种植。
茎尖培养脱毒技术：病毒侵染葡萄后，依靠筛管进行转移。对于幼嫩的茎尖分生组织，在细胞尚未充分分化以前，病毒无法到达。因此，切取极小的茎尖分生组织作为外植体进行培养，可获得无毒植株。人们已采用这种方法脱除了热处理难以脱掉的葡萄卷叶病毒、葡萄斑点病毒和葡萄黄斑类病毒等。取生长旺盛的嫩梢，自来水冲洗10～20分钟，无菌条件下用0.1%升汞消毒5～10分钟，无菌水冲洗数次，在双目解剖镜下，逐层剥去幼叶和叶原基，露出生长点后，切取0.2～0.3mm长、带有2～3个叶原基的茎尖，立即接种到培养基上，进行培养、增殖、生根和移栽。
热处理结合茎尖培养技术：热处理和茎尖培养的脱毒效果，往往因葡萄品种和病毒种类的不同而存在很大差异，单独使用其中的一种方法有很大局限性，特别是需要同时脱除多种病毒时，单一方法顾此失彼。有鉴于此，人们已开始将热处理和茎尖培养结合起来，脱毒效果明显提高，而且由于切取的茎尖较大，易于培养成活和长成丛生苗，加快了无病毒母本树的繁育进程。这种方法又可分为盆苗热处理后茎尖培养和试管苗热处理两种方法。盆苗热处理后茎尖培养就是先将盆栽葡萄苗放入培养箱中热处理1～3个月，然后切取2mm～3mm茎尖进行离体培养。试管苗热处理则是将带毒试管苗置于恒温培养箱中，在32℃～37℃、每天光照10～12小时条件下，培养1～2个月，然后切取2mm～3mm茎尖进行培养。
除以上三种脱毒方法外，还有微体嫁接法和抗病毒剂法等，但这些方法极少有应用。需要说明的是，采用任何方法获得的脱毒材料，都必须进行病毒检测，确系无毒后，才可作为无病毒原种母本树，用来繁殖葡萄无病毒苗木。
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