无核品种选育岗位

王跃进

1 杂交亲本的选择选配

根据育种目标，选择性状优良的种子败育型无核葡萄做母本，选择具独特性状（如抗病、抗逆、大粒、无核等）的品种或株系做父本，设置杂交组合。

2 葡萄花粉的采集、去雄和杂交授粉

（1）花粉采集 在作父本的葡萄品种的初花期（花穗中10%左右的小花开放）采摘花穗，带回实验室，摘下或搓开花冠，露出花药，平摊在白纸上，放在日光灯下或阴凉干燥处4～10小时至花药裂开，花粉散出。用细纱网筛去花柄子房等，留下花药研磨，装入青霉素小瓶，封口，放入装有无水CaCl2作干燥剂的瓶内低温保存。

（2）去雄 选择生长健壮的植株，在作母本的葡萄品种开花前2～3天（花蕾顶端鼓起变圆，变为黄绿色）开始去雄，选择发育健壮的花穗，一个结果枝保留一个花穗。左手轻捏住穗尖以固定花穗，轻轻摘取花冠，注意不损伤柱头，最后掐去捏过的1/4穗尖，检查有无遗漏的花冠，用手持喷壶喷水，以冲去粘附在柱头上的花粉和使柱头保湿，然后套袋封口，挂牌。

（3）授粉 杂交授粉在去雄后的第二天开始进行（柱头上应有粘液）。在早晨和傍晚，避开高温的正午时间，将花粉装在放有冰袋的冰壶里提到田间葡萄园。用镊子夹住脱脂棉粘取父本品种花粉散在已去雄的母本品种花穗上，授好后迅速套袋，挂牌上记录。连授3天。

在采集花粉、去雄和授粉操作时都要注意避免花粉的交叉污染，在更换品种时用70%乙醇喷手和器具以杀死花粉。

3 无核葡萄杂交胚挽救

（1）取样 对配置的杂交组合，杂交胚珠的取样时间从最后一次的授粉日期开始计算。不同取样时期去田间取回杂交幼果。在研究获得了某一无核品种的最佳取样时期后，即按照确定的时间取样。

（2）胚挽救操作 田间采摘的幼果带回实验室后，剪成单个果粒放入广口瓶内，先用自来水冲洗，用70%乙醇浸润30秒后用无菌水冲洗1次，将广口瓶放入超净工作台，倒入含有效氯1％的次氯酸钠溶液浸泡果粒10-15分钟，期间振荡2-3次，再用无菌水漂洗2-3次。在超净工作台上用无菌的镊子和手术刀在培养皿中将无菌果粒剖开，从剖开果粒中选取长度大于2mm的胚珠接种培养在胚珠发育培养基中，每个150ml三角瓶内接种20个胚珠，进行暗培养，此阶段为胚珠培养阶段。60天后在解剖镜下剖开胚珠，在胚珠内的喙端发现的白色胚即为发育胚。有发育胚的胚珠数量占接种胚珠总数的比率即为胚发育率。将发育胚接种在固体胚萌发培养基上，每只试管（20mm×150mm）接1个胚，胚刚接种7～10天内进行暗培养，胚开始萌动后改为光照培养。胚的子叶、胚根有伸长的视为萌发胚。

以萌发胚数占接种胚数的比率作为胚萌发率。此阶段为胚萌发阶段。待胚萌发长成正常完整苗后，剪成1cm的带叶茎断接至继代生根培养基上继代扩繁2瓶（150ml三角瓶），每瓶2株，光照培养。此阶段为成苗阶段。培养室条件：温度25～30℃，相对湿度40%～60%，光照强度40μmolm-2s-1，每天16小时。

4 无核葡萄胚挽救苗的炼苗移栽

选择继代培养基上生长的壮苗，将三角瓶放置在温室中或向阳的窗台边，进行逐渐增加光强和昼夜温差锻炼7～15天。在试管苗移栽的前1～2天可将封口膜解开透气以便锻炼试管苗的叶片气孔开合能力。同时准备试管苗移栽基质，将购买的营养基质加水润湿后进行高压灭菌。移栽时先将灭过菌的基质装入底部已扎孔的纸杯2/3高度，移栽时将三角瓶内倒入少量蒸馏水，用镊子将固体的培养基划散，夹住试管苗根颈部，轻轻晃动将琼脂抖落干净，放入纸杯，用湿润的营养基质掩埋根部，立即浇1000倍的多菌灵溶液，扣上透明塑料杯保湿，温度控制在25℃左右。3~5天以后开始逐渐降低湿度，同时逐渐增加光强。每7天浇一次1/4MS营养液和1000倍的多菌灵溶液。待移栽的试管苗长出新根和2～3片新叶，移至花盆或苗圃地，刚移栽后要适时遮阴，注意及时浇水和除草。田间管理注意防治病虫害和及时绑缚牵引促进生长。秋季出圃，第二年春天定植大田。