无核品种选育岗位

　　采用底来特×克瑞森无核杂交组合，每年5月13日采取克瑞森无核的花粉，14日对底来特进行去雄，去雄1-3天进行杂交授粉，共授粉20穗，坐果9穗，花后45-50天采取果穗，将田间采摘的幼果带回实验室后，剪成小穗放入广口瓶内，先用自来水冲洗，用70% 乙醇浸润30秒后用无菌水冲洗1次，将广口瓶放入超净工作台，倒入含有效氯1％的次氯酸钠溶液浸泡果粒15分钟，期间振荡2-3次，再用无菌水漂洗2-3次。

　　在超净工作台上用无菌的镊子和手术刀在培养皿中将无菌果粒剖开，从剖开果粒中选取长度大于2mm的胚珠培养在胚珠发育培养基中，以MM3+6%蔗糖+0.05%水解酪蛋白+0.3%活性炭+0.7%琼脂。作为固体培养基、ER+0.3%活性炭作为液体培养基采用固液双层胚珠发育培养基，每个三角瓶内接种10个胚珠，进行培养，此阶段为胚珠培养阶段。

　　6 0 天后在解剖镜下剖开胚珠，将发育胚接种在WPM+1.0mg/ L I A A + 0 . 5 m g / L B A + 0 . 5 m g / LGA3+2%蔗糖+0.05%水解酪蛋白+0.3%活性炭+0.7%琼脂的固体胚萌发培养基上，每个250mL的玻璃三角瓶接1个胚，胚刚接种7～10天内进行暗培养，胚开始萌动后改为光照培养，此阶段为胚萌发阶段。

　　待胚萌发长成正常完整苗后， 剪成2cm的带叶茎段接至1/2MS加不同激素及其组成的培养基上进行继代壮苗生根培养基上，继代扩繁，此阶段为成苗阶段。

　　培养室条件：温度25～30℃， 相对湿度40％～60％，光照强度40 μmolm-2s-1，每天16小时。在2012年3-4月将培养室内的无菌苗移至营养钵炼苗，再至温室，最后至苗圃地。

　　首先选择继代培养基上生根的壮苗，将其放置在光强逐渐增强和有昼夜温差的炼苗室锻炼7～15 天。同时准备试管苗移栽基质，用不同浓度配比的培养基母液浇透后高压灭菌，装入营养钵1/2高度，尽量使用容积比较大的营养钵进行移栽。

　　移栽时直接取出试管苗，在这个阶段没有采取开口锻炼，避免了开口锻炼期间杂菌的滋生，直接用无菌水将根部琼脂清洗干净，此时设计对照用生根粉浸泡不同的时间后放入营养钵，用无菌湿润的营养土掩埋根部，用油漆在营养钵钵体上进行标记，标记醒目方便而且不容易混淆，每株苗子浇2000倍质量分数25％的多菌灵液，盖上透明的大的一次性塑料杯子保温保湿，此时一定注意用土质把杯子四周压实，使苗子处于一个相对密封的环境中，而且用大容积的一次性塑料杯子保证了苗子生长的空间。然后将所有的移栽苗置于炼苗室中，给予充足的光照和温度，每隔3-5天浇水。

　　一个月后逐渐启开一次性杯子，至最后完全去除一次性杯子， 时间持续至少40-60天，切忌不要过早去除上面罩的一次性杯子，否则苗子会失水死亡，去除杯子后待移栽的试管苗长势茁壮并长高1-2 倍之后，移至小拱棚保持湿度，温度控制在25-28ºC，并注意遮荫。以后逐渐降低湿度至揭棚，每7天浇一次1/4MS营养液和2000倍的多菌灵液，最后移至苗圃地，挂牌，统计移栽成活率。

　　秋季出圃，统计苗圃成活率。第二年春天定植大田。在培养试管苗的整个过程中一旦出现已经成苗的试管苗受到污染的情况，这时候应该及时取出苗子进行炼苗移栽， 杜绝感染的苗子最终死亡在试管中，这种苗子移栽及时成活几率一般是很大的，避免了不必要的损失。