制汁葡萄品种改良岗位

王雁莹 郭印山 林洪 郭修武

  葡萄是世界上种植广泛的果树种类，具有重要的经济价值。但在栽培过程中，其易受各类病原菌的侵染，其中灰霉病是葡萄生产中的一种主要病害。葡萄灰霉病（Botrytis cinerea Pers）18世纪被希腊人首次发现（刘长令，2000），之后19世纪60年代，发现其有性后代（Brent et al., 1998）。到1980年,葡萄灰霉病已发展成制约葡萄经济生产的重大病害之一。随着设施葡萄栽培的兴起，大棚内温湿度小气候环境十分有利于灰霉病病菌的侵染与危害，灰霉病成为设施葡萄生产的主要病害，并随着设施栽培面积的扩大而日益严重。目前，虽采用高效能杀菌剂，但因葡萄灰霉病造成的损失仍高达20%-50%。在葡萄属植物中，灰霉病抗性葡萄种内与种间都呈现出了很大的差异性，一般东亚种群抗灰霉病的能力较强，欧亚种葡萄抗病能力略低些，欧洲鲜食葡萄的抗病性更低(Gabler et al., 2003)。酿酒葡萄品种中赤霞珠、梅鹿辄、西拉和雷司令比霞多丽与白诗楠的抗灰霉病强，中国野生葡萄种质中山葡萄双优、通化3号、燕山葡萄燕山-1 和秦岭葡萄平利-5等的抗病性都极高，尤其是山葡萄抗性最高(姜建福等，2010)。

  为了进一步了解不同葡萄种质资源对霜霉病的抗性。本研究利用沈阳农业大学葡萄基地的101份葡萄种质资源资源进行灰霉病的抗性鉴定，为生产上筛选和栽培抗病种质资源提供参考依据。

  1 材料与方法

  1.1 试验材料

  试材取自于沈阳农业大学葡萄园试验基地，共101个葡萄品种资源，每个种质资源选取3个植株，选取的叶片为新梢顶端往下数第3-5片叶完全展开的叶片，树体栽植的方式为棚架栽培，101份葡萄种质资源鉴定材料见表1。

  1.2 试验方法

  1.2.1 葡萄灰霉菌的培养与扩繁

  葡萄的灰霉病病原菌Botrytis cinerea Pers来自北京市农林科学院植物保护研究所，该病原菌是一种真菌微生物为葡萄专性寄生，可以使用PDA（Potato Dextrose Agar）培养基离体培养，在21 °C 100%相对湿度，16 h光照，8 h暗光黑暗下，培养3-5天，灰层形成时取出，用涂布器将PDA培养基中的孢子刮下，制成孢子悬浮液，并在万能显微镜下观察，以25×16型的血球计数板进行浓度计算，始最终孢子侵染浓度为1×105个/ml时活力最高再进行侵染。

  1.2.2 葡萄品种资源的灰霉病抗性鉴定

  通过室内离体叶片接种法对葡萄进行抗灰霉病鉴定，具体操作方法为：均采取当年生枝条上第三到第五片成龄的叶片，每个植株选取3个叶片，用蒸馏水清洗干净后擦干待用，将制备好的孢子悬浮液采用五针刺伤的方法接种在叶片的正面（避开叶片主叶脉），同时每个叶片都接种3处，每株都设3个生物学重复，再将接种后的叶片置于培养皿下底内保湿，上盖覆有浸湿但不接触叶面且不滴水的滤纸，用封口膜密封保湿，并放在条件为28 ℃；100%相对湿度，16 h光照，8 h暗光的培养箱（MLR-352H-PC，Panasonic）内培养，侵染的叶片直接培养72 h。最后使用智能叶面积测量仪（型号YMJ-C）统计叶面积及平均病斑面积(病情严重度DS)，并做好记录进行抗性调查。参考Poolsawat 和 Liu SM （2012; 2003）的方法，加以改进后方法如下：

  DS ≤20.00 %为 1 级；在20.00 %<DS≤25.50为 2 级；在25.50<DS≤36.00为 3 级；在36.00<DS≤46.50为4 级；在46.50%<DS≤57.00为 5级；在57.00<DS≤74.50为 6级；在74.50<DS为7级。

  再将7个级别的灰霉病DS（病情严重度）按其定义划分抗病等级，0~1.50为高抗类型(HR )，1.51~3.50为抗病类型(R )，3.51~4.50 为中抗类型(MR)，4.51~6.50为感病类型(S )，6.51~7.0为高感类型(HS )。

  1.2.3 数据处理分析

  用 Microsoft Excel 软件进行试验数据初步处理，采用 SPSS19.0软件进行数据处理分析，使用Adobe Photoshop 软件进行图片处理。

  2 结果与分析

  2.1 葡萄灰霉病原菌培养结果

  如图1 A所示，灰霉病原菌培养3 d后，菌丝活力较强，白色稀疏状菌均匀分布且未产生孢子；图1 B为灰霉病原菌培养3-5 d后，菌落呈灰色时孢子活力及致病力较强。为下一步孢子侵染试验做准备。

  2.2 葡萄品种资源的灰霉病抗性鉴定结果

  如表1对其进行分析，供试101份葡萄品种中均不存在免疫类型。在14份中国野生葡萄品种中，高抗品种有2份，为双优和秦岭桑叶，抗病品种有9份，2份感病品种和1份高感品种；欧美杂种葡萄中未发现高感品种，有高抗品种4份（皇冠、金星无核、高妻、火星无核），抗病品种25份（巨峰等），中抗品种9份，感病品种7份；欧亚种葡萄品种不存在高抗品种，抗病品种5份，为沈农金皇后和葡萄园皇后等，中抗品种3份（里扎马特等），感病品种19份和高感品种9份（红地球、玫瑰香、维多利亚和无核白鸡心等）。结合表1可看出，美洲种葡萄着色香和康可均为高抗品种；4份欧山杂种葡萄品种均为抗病品种；高感品种均为欧亚种葡萄品种。

  通过对灰霉病病抗性表型数据的统计和分析，由表1和图2中数据可以看出，不同葡萄品种对灰霉病的抗性差异明显。在101份品种中，高抗（HR）材料8份，抗病（R）材料43份，中抗（MR）材料12份，有28份材料表现为感病（S），10份材料表现为高感（HS）。

  本研究采用室内人工接种鉴定的方法，对101份葡萄种质资源的灰霉病抗性进行了鉴定和评价，确定了不同品种对灰霉病的抗性能力，筛选出了抗灰霉病的品种资源，研究结果为今后葡萄抗病育种中亲本选择与选配奠定了基础，也为生产中制定合理的防病技术措施提供了理论参考。