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病虫害防控研究室
张尊平 董雅凤 范旭东 任芳
脱病毒技术是培育葡萄无病毒苗木的基础。采用热处理、茎尖培养及茎尖培养结合热处理等技术，能脱除多种葡萄病毒，其中，茎尖培养结合热处理方法脱毒效果较好，最为常用。
1 热处理脱毒
高温可使病毒钝化，抑制病毒的繁殖和扩展。美国早在20世纪60年代初就开始应用热处理方法脱除葡萄病毒，该法现已被世界各国广泛采用。具体步骤如下：
（1）春季将需热处理的材料在营养土中进行扦插繁殖。插条生根后，于5月份移入花盆中，在温室内培养。加强肥水管理，促进分枝。第二年春天，当新梢长15～20cm时，即可进行热处理。
（2）将准备脱毒的苗木放入热处理箱中进行处理。热处理所需温度因病毒种类而异，一般为35～40℃。为减少高温对植株的伤害，近年来，人们开始采用变温热处理方法（如，白天40℃、16小时；夜间35℃、8小时）。热处理所需时间与病毒种类有关，短者20天即可，长者需要120天，甚至更长时间。据报道，葡萄扇叶病毒对高温最敏感，38℃下培养1个月，即可脱除；葡萄卷叶病毒一般需要处理60天以上；皱木复合相关病毒最难脱除，一般需处理3～5个月。在确保热处理苗木成活的情况下，适当延长处理时间可提高病毒脱除效果。
（3）热处理达到预定时间后，剪取1.5～2cm的新梢顶端，嫁接到无病毒砧木上或者直接扦插生根。
（4）嫁接或扦插成活的葡萄苗，单株编号种植。采用血清学（ELISA）、分子生物学（PCR）和生物学（指示植物）方法进行病毒检测，明确脱毒结果。
2 茎尖培养脱毒
病毒侵染葡萄后，依靠筛管进行转移。对于幼嫩的茎尖分生组织，在细胞尚未充分分化以前，病毒无法到达。因此，切取极小的茎尖分生组织作为外植体进行培养，可获得无毒植株。人们已采用这种方法脱除了热处理难以脱掉的葡萄卷叶病毒、葡萄斑点病毒和葡萄黄斑类病毒等。
（1）取生长旺盛的嫩梢，自来水冲洗10～20分钟，无菌条件下用0.1%升汞消毒5～10分钟，无菌水冲洗数次，在双目解剖镜下，剥去幼叶和叶原基，露出生长点后，切取0.2～0.3mm长、带有2～3个叶原基的茎尖，立即接种到培养基上。
（2） 在适宜条件下进行培养、增殖、生根和移栽。
（3） 不同茎尖单独编号，对试管苗和移栽成活的植株采用血清学（ELISA）、分子生物学（PCR）和生物学（指示植物）方法进行病毒检测。
3 热处理结合茎尖培养
热处理和茎尖培养的脱毒效果，往往因葡萄品种和病毒种类的不同而存在很大差异，单独使用其中的一种方法存在很大局限性，特别是需要同时脱除多种病毒时，单一方法顾此失彼。有鉴于此，人们已开始将热处理和茎尖培养结合起来，脱毒效果明显提高，而且由于切取的茎尖较大，易于培养成活和长成丛生苗，加快了无病毒母本树的繁育进程。这种方法又可分为热处理后茎尖培养和试管苗热处理两种方法。热处理后茎尖培养就是先将盆栽葡萄苗放入培养箱中热处理2～3个月，然后切取1～2mm茎尖进行离体培养。试管苗热处理则是将带毒试管苗置于恒温培养箱中，在32～37℃、每天光照10～12小时条件下，培养1～2个月，然后切取1～2mm茎尖进行培养。
除以上3种脱毒方法外，还有微体嫁接法和抗病毒剂法等，但这些方法少有应用。需要说明的是，采用任何方法获得的脱毒材料，都必须进行病毒检测，确系无毒后，才可作为无病毒原种母本树，用来繁殖葡萄无病毒苗木。
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