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病虫害防控研究室
董雅凤 张尊平 范旭东 任芳
采用组织培养方法繁殖无病毒葡萄苗，能常年进行，可达到快速育苗的目的，以满足生产需要。
1 培养基制备
根据MS培养基成分表，分别称取大量元素、微量元素、铁盐、维生素等，加蒸馏水定容，配制MS母液。吲哚乙酸（IAA）、赤霉素（GA3）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）等用少量95%乙醇溶解后加蒸馏水定容。6-苄基嘌呤（BA）用少量1N HCl溶解后，加蒸馏水定容。
分化增殖培养基为改良MS附加GA30.1～0.5ppm、IBA0.1～0.5ppm、BA0.5～1.0ppm、蔗糖30g/L、琼脂5g/L。生根培养基为1/2MS附加IBA0.1～0.3ppm、NAA0.05～0.2ppm或IAA1.0～1.5ppm、蔗糖15g/L、琼脂5g/L。
依次吸取各种母液及生长调节剂溶液，混合，定容，用1N HCl或1N NaOH调节pH至5.8。稍加热，即放入琼脂，待其溶解后，加入蔗糖，充分搅拌溶解，分装到三角瓶中。封口包扎，放入高压灭菌锅内，121℃、1.1kg/cm2下消毒15～20min。消毒完毕尽快取出，平放，冷却。
除MS培养基外，有报道称改良B5培养基也可得到满意效果。另外，培养基中激素的浓度应根据品种和试管苗生长情况的不同进行调节。
2 分离培养
从无病毒母本树上采取生长旺盛的嫩梢， 去掉大叶， 剪成2～3cm长茎段，用自来水冲洗干净，在超净工作台上进行消毒处理。消毒液可选用0.1%升汞（消毒5～10min）、5%次氯酸钠（消毒10～15min）、10%次氯酸钙（消毒5～10min）等。消毒后的材料置灭菌水中泡洗3～4次。切掉接触药剂的剪口，剥取顶梢及带一个腋芽的茎段，接种到分化增殖培养基上（顶芽和腋芽均应露出培养基，以利生长发育）。然后置于温度20～28℃，光强1500～2000lux，每天光照10h的条件下培养。
分离培养是建立无菌繁殖体的第一步，十分关键。为了获得较高的成活率，在培养前应针对需要培养的品种，查阅一些相关文献资料，确定比较适合的培养基及激素浓度。取材时要选择生长旺盛、无病虫为害的植株。取材时间最好在春季。因为，这时顶芽和腋芽均有较大生长潜势，且新生嫩梢带菌少，培养成活率比休眠期高。
3 继代繁殖
培养成活的试管苗， 每隔30～40d转接一次。将试管苗切割成带1～2个腋芽的茎段，接种在增殖培养基上。增殖培养中常会出现玻璃化苗。这种苗子毫无价值，只能淘汰。出现这种情况时，应降低分裂素和氮素浓度，增强光照和培养容器的透气性。另外，如发现试管苗被真菌或细菌污染，应予汰除，以防交叉感染。
4 生根培养
将高度达到2cm以上的嫩梢接种到生根培养基上，15～20d后即可生根。增加继代培养次数，生根率和生根质量都会有所提高。
5 生根试管苗移栽
初春是生根试管苗的移栽适期，温度保持在15～25℃，成活率可达80%以上。移栽前，将生根试管苗置于强光下，闭瓶炼苗10～15d，开瓶炼苗1～2d（瓶中加少量水使培养基软化）。轻轻洗掉根部粘附的培养基。在基质（草炭∶蛭石=1∶1）中挖小穴或划小的条沟。移栽，浇透水，覆盖有色塑料薄膜保湿遮阴。一周后，逐渐通风透光。
6 移入苗圃
将移栽成活的苗子移到室外炼苗1～2周。圃地开沟打垄，施入基肥，苗子带基质移栽，浇透水。栽植葡萄无病毒苗的圃地要求不能重茬，无传毒线虫，距离普通葡萄园20m以上。
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