病毒病防控岗位

范旭东　董雅凤　张尊平　任芳　胡国君　李正男

　　2003年，在意大利北部特伦蒂诺地区，一些葡萄园的灰比诺（cv. Pinot gris）葡萄品种呈现明显的病毒病症状，主要表现为叶片褪绿斑驳、皱缩、变形等（图1A和1B）。之后的几年，塔明娜（cv.Traminer）和黑比诺（cv. Pinotnoir）葡萄品种也被发现表现相似的病毒病症状，其中，塔明娜品种的病毒病最为严重，导致植株萎缩，产量显著降低（图1C和1D）。通过电镜观察及常规的检测手段对其病原进行鉴定，均未发现引起该病害的相关病毒。直到2012年，意大利学者采用小RNA测序技术，对表现褪绿斑驳、变形症状的灰比诺葡萄叶片进行深测序，发现了一个新的葡萄病毒，命名为灰比诺葡萄病毒(Grapevine Pinot gris virus,GPGV)，与之前报道的葡萄浆果内坏死病毒(Grapevine berry inner necrosisvirus, GINV) 亲缘关系较近，同属于发状病毒属。

　　目前，GPGV在意大利、南韩、斯洛文尼亚、斯洛伐克、捷克、希腊、法国、土耳其、克罗地亚、塞尔维亚、黑山、波斯尼亚、马其顿、乌克兰、罗马尼亚、西班牙、葡萄牙、中国、美国、加拿大和德国等国家相继被报道。这些报道显示，在表现褪绿斑驳等症状的葡萄样品中，能频繁地检测出GPGV，而未发现其他可能相关的病毒（葡萄扇叶病毒等线虫传多面体病毒），说明GPGV的侵染与这些葡萄样品褪绿斑驳症状的发生具有较高的相关性。生物学实验结果表明，未感染GPGV的葡萄样品不表现症状，而感染GPGV的葡萄样品大多数表现明显的症状，但也存在少数样品隐症。通过对显症和隐症样品中的GPGV进行基因组测序及分析，表明显症和隐症样品中GPGV序列的MP基因终止密码子存在明显差异，因此推测，可能由于GPGV分离物MP终止密码子的变异，导致其在葡萄上表现潜隐。

　　上述结果证明GPGV与灰比诺和塔明娜样品症状的发生相关，同时也表明症状的发生与不同的GPGV变种侵染有关。与GINV相似，最近的研究结果证明了GPGV可通过葡萄瘿螨(Acari: Eriophyidae)在田间进行传播。此外，研究者发现感染GPGV的葡萄园的一些杂草，包括白藜(Chenopodium album L.)和白花绳子草 (Chenopodium album L.), 也表现明显的病毒症状，经检测携带GPGV，说明除葡萄外，GPGV存在其他天然寄主。由于葡萄瘿螨专性取食葡萄，因此，草本植物和葡萄中的GPGV不可能通过螨虫进行彼此传播，那么，是否存在其他的传播方式导致草本植物和葡萄中GPGV相互传播仍需要进一步的研究证明。

　　葡萄产业体系病毒防控团队根据GenBank已报道的GPGV分离物的MP和CP基因，分别设计了4对引物，用于GPGV分离物的PCR和式PCR检测。2014-2015年对来自全国不同地区的79个葡萄样品进行检测，结果新疆、甘肃、宁夏、辽宁、北京、上海等地的部分葡萄样品中检测到该病毒，平均检出率为31.6%（25/79）。在感染GPGV的葡萄样品中，大部分葡萄品种未表现明显的症状，仅一部分葡萄品种表现明显的褪绿斑驳症状。将5个感染GPGV的葡萄样品（其中一个表现褪绿斑驳）通过嫩芽嫁接的方式传毒至脱毒贝达葡萄（设3个重复）后，所有嫁接的贝达葡萄叶片均表现褪绿斑驳症状。我们对其中一个嫁接后表现症状的贝达样品叶片进行小RNA测序，测序结果显示该样品携带沙地葡萄茎痘病毒，灰比诺葡萄病毒及葡萄红地球病毒，由于沙地葡萄茎痘病毒和葡萄红地球病毒在葡萄上通常不表现症状，因此推测嫁接的贝达样品表现的褪绿斑驳症状，很可能由于GPGV侵染引起的，同时也说明贝达对GPGV比较敏感。考虑到GPGV的危害性以及在全世界广泛分布的特点，有必要对该病毒的致病性进行进一步研究。